概述
免疫组化是一种通过特异性抗体与患者样本中的特定抗原结合的技术。它是一种常用的实验室技术,广泛应用于临床诊断、治疗以及科学研究领域。通过使用一个或多个标记(如荧光、辐射性分子或酶物质等),免疫组化可以有效地检测出蛋白质、肽、细胞、组织等生物分子。
操作流程
免疫组化技术主要由以下步骤组成:
1.样品处理:首先,需要收集带病样本组织或细胞,切片,挂片,或制备成细胞悬液。对于种类不同的样本,其处理 *** 也可能存在差异。
2.抗体结合:接下来,将已知特定抗原的抗体标记化,例如荧光物质或酶。将标记抗体添加到样品中,以与目标抗原结合。对于细胞、组织样品可以采用固相免疫法。抗体需要特异性的识别抗原。
3.信号检测:将样品与第二抗体结合,该抗体与之一抗体不同,用于检测之一抗体结合的目标抗原。第二抗体是能与之一抗体的Fc区结合 特异性的抗体。检测的 *** 可以是荧光显微镜、原位杂交、酶标记化学荧光等。如需可视化试验结果可以使用荧光染料。
质量控制
免疫组化中的检验结果可能受到多种因素的影响,如抗体质量、反应条件、样本类型等。因此,质量控制是至关重要的。在实验中需要进行多重对照,同时必须涵盖阴性、低表达、中等表达、高表达、阳性的样本。同时在反应中,121摄氏度下煮沸可以去除碱性磷酸酶和碱性核酸,有助于特异性地检测抗原。此外,质量控制可以通过相关质量控制步骤来实现,如免疫组织化学标准化协会(TASCA)中提供的标准程序,以确保结果的准确性和可重复性。